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RT-qPCR专用预混液

HiScript® III RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper)

更高效的两步法RT-qPCR预混液(去基因组)

简便快捷的操作:5 × HiScript®III qRT SuperMix包含逆转录反应所需的所有组分,只需加入模板 RNA,20 min内即可完成逆转录反应

广泛的模板兼容性:可兼容不同物种,完整度较差的 RNA 模板

超强的杂质耐受度:对于逆转录常见杂质如乙醇、异丙醇、水平衡酚、异硫氰酸胍、腐殖酸等,具有超强的耐受度

卓越的逆转录效率:与常见市售逆转录产品相比,HiScript® III RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper) 逆转得到的cDNA定量CT值最小,具有卓越的逆转录效率

1.简便快捷的操作

HiScript® III RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper)(Vazyme #R323)包含基因组清除模块,可彻底去除 RNA 模板中残留的基因组 DNA;同时Vazyme #R323 包含逆转录反应所需的所有组分,只需加入模板 RNA,20 min 内即可完成逆转录反应,操作简便快捷。

2.广泛的模板兼容性

分别以 HeLa 细胞、小鼠肝脏、拟南芥叶片的完整 RNA 与降解 RNA 为模板,使用 HiScript® III RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper) (Vazyme#R323)以及市售常见品牌逆转录试剂 (Supplier T) 进行逆转录。将得到的 cDNA 进行多个基因的 qPCR 定量分析,以不同基因为横坐标,扩增 CT 值为纵坐标绘图,比较不同产品的逆转录效率。从图中可以看出,以 HeLa 细胞、小鼠肝脏、拟南芥叶片完整 RNA 以及降解 RNA 为模板进行逆转录定量,Vazyme #R323的扩增CT 值小于或等于T公司相关产品,说明Vazyme #R323逆转不同物种RNA、完整度较差的RNA模板皆具有卓越的逆转录效率。

3. 超强的杂质耐受度

在RNA的提取过程中常常因操作或样本的特殊性导致RNA中混有有机试剂或杂质,这些物质的残留会严重影响逆转录效率。乙醇、异丙醇、水平衡酚、异硫氰酸胍、腐殖酸是 RNA 提取过程中较为常见的杂质,测试其对逆转录效率的影响。

分别对上述 5 种杂质设置 3 个不同浓度梯度,添加至 HiScript ® III RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper) (Vazyme #R323) 逆转录体系中,将得到的 cDNA 进行 qPCR 检测。以不同浓度杂质为横坐标,△CT  (△CT = 含杂质逆转录 cDNA 扩增 CT 值 – 未含杂质逆转录 cDNA 扩增 CT 值 ) 为纵坐标绘图。从图中可以看出,△CT 均小于 0.15,说明 Vazyme #R323 对上述 5 种常见杂质具有极强的耐受度。

4. 卓越的逆转录效率

以 100 ng HeLa RNA 为模板,使用 HiScript® III RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper) (Vazyme #R323) 以及市售其他逆转录产品 ( 分别来自Supplier Ta、Th1、Th2、N、P、R、B、Tr、Ti),按照各自说明书推荐程序进行逆转录反应。将得到的 cDNA 进行多个基因的 qPCR 定量分析。以不同公司产品为横坐标,△CT (△CT = Vazyme #R323 cDNA 扩增 C值 – 各公司逆转录产品 cDNA 扩增 CT 值 ) 为纵坐标绘图。从图中可以看出,除一些体系Th1 △CT >0 外,其余公司逆转录产品均△CT <0,说明 Vazyme #R323 逆转录效率优于 Ta、Th2、N、P、R、B、Tr、Ti 相关逆转录产品。

   

HiScript® III RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper)为HiScript® II二代产品的升级产品,包含全新升级三代逆转录酶 HiScript® III Reverse Transcriptase与针对逆转录特殊优化的最适 Buffer,进一步提高了cDNA合成效率。本产品包含基因组清除模块,可彻底去除 RNA 模板中残留的基因组 DNA,确保后续定量结果更加真实可靠。与此同时,本产品将所有逆转录反应所需组分融于一管,只需加入模板 RNA,20 min 内即可完成逆转录反应,同时终止gDNA wiper作用,保证cDNA的完整性,并减少操作步骤,有效防止在操作过程中带来的污染。

组分

R323-01 (100 rxn)

RNase-free ddH2O

2 ×1 ml

4 ×gDNA wiper Mix

400 μl

5 ×HiScript III qRT SuperMixa

400 μl

5 ×No RT Control Mixb

40 μl

a. 包含Buffer、dNTP、HiScript®III Reverse Transcriptase、RNase inhibitor、Random primers/Oligo (dT)20VN primer mix。

b. 除不含HiScript®III Reverse Transcriptase外,其余成分与5 × HiScript®III qRT SuperMix 相同,用于配制No RT对照反应。

- 30℃~- 15℃保存。